培养细胞转染效率的测量

获取没有荧光模糊的清晰图像

转染(transfection)是通过向动物细胞内注入核酸的手法,将特定的基因注入细胞,从而使作为目标的蛋白质表达出来的方法。

借助这种手段,可以对导入效率等进行分析等,是现代医学研究中不可或缺的手法。

基因导入能否成功,取决于导入条件的匹配程度,各类领域的研究人员都在不断摸索适宜的手法。

其中的手法很多,主要可分为(1)化学手法、(2)生物学手法、(3)物理手法这三大类。这些手法各有优缺点,必须根据试验要求及细胞类型等,选择适宜的试验方法。

选择适宜的手法后,需要对细胞系统健全性、生存率、细胞密度等确保转染顺利开展的必需要素进行调节后开始试验。其中尤为关键却也令众多研究人员费心劳神的环节,就是正确测量转染效率。

使用荧光显微镜是一种测量转染效率的常用手法。对观察到的细胞总数与荧光表达细胞数进行计数及评分,据此测量转染效率。但在实际操作中,传统的荧光显微镜存在各类问题,经常会让操作者耗费不少心力。

例如,要进行荧光观察,必须先将样本带进暗室,在暗室内进行试验,作业效率非常低。其次,由于难以正确提取细胞的轮廓,会对正确计数造成妨碍。

荧光观察时激发光导致的淬灭也是困扰众多研究人员的难题之一。由于保持细胞的健康状态非常重要,研究人员们始终在寻求不会弱化细胞的方法。

还有许多人表示,要实现计数及分析,必须配备独立于荧光显微镜系统之外的其他软件,这为分析工作的顺利开展带来了不小的困难。

通过相位差计数细胞
通过相位差计数细胞
将细胞作为掩模,计数表达(荧光)
将细胞作为掩模,计数表达(荧光)
将细胞作为掩模,计数表达(荧光)
细胞
903个
表达
89个
效率
9.9%

使用物镜:CFI Plan Fluor DL 10x

如果引进All-in-One荧光显微成像系统BZ-X800