菌落计数与面积测量的高效化

菌落计数与面积测量

为确保产品安全性而实施的微生物检查或遗传毒性试验。在微生物检查中，对培养基上活菌菌落数量的经时变化进行计数，以计算菌数量的形式并进行微生物评价。另外，在作为一种遗传毒性试验的Ames试验（艾姆斯试验）中，向原本无法自己产生氨基酸的菌株投入试验物质，根据其中形成的菌落及其比重来评价诱发突变性。
在此类实验中，需要对随着时间变化而在培养板上增殖，变化的活细胞或菌落进行区分测量，如果凭借测量人员的目视测量计数，容易产生数值的偏差或人为误差，影响对该培养板的准确评价。以高倍率观察培养板或计数并评价形成的菌落时，由于视野变窄无法快速观察培养板整体的情况，需要花费大量时间逐一视野查看计数。而且还有很大的风险漏看错看。

另外，在再生医疗研究领域，观察培养板整体并准确分析iPS细胞菌落数量是评价该实验的重要方法。并且，在以改善培养工序以及提高培养效率为目的的实验中，需要大量进行针对不同条件、培养基种类以及传代方法等对比试验。
但是，在菌落计数或测量中，因各工作人员手动计数的标准以及方法不同造成的结果的偏差和人为误差，会影响统计结果的准确性。尤其是iPS细胞在培养过程中形成菌落的同时细胞也在自我增殖，菌落内的细胞形态会发生变化。因此，细胞间的界限可能难以判断，更增大了目视计数的难度进而影响评价的准确性。

在发生手动计数错误或自动计数时发生误检时，需要花费大量时间和经费重新开启实验。在各种检查或测试、实验等中，在人数有限的情况下消除劳力与时间上的浪费，并取得更多成果，必须同时提高数据准确性与工作效率。

解决菌落计数与面积测量的案例

基恩士的一体化荧光显微成像系统BZ-X，仅需1台即可以多功能支持荧光、相位差、明视场观察及各种拍摄方法。还可实现培养板的整体观察、定量菌落计数及面积测量等，解决实验、研究或试验、检查中的诸多课题。
结合使用电动载物台的全自动图像拼接模块来观察培养板整体，以及对iPS细胞培养板的整体图像进行菌落分析的案例，介绍导入BZ-X的优点。

培养板整体中iPS细胞菌落计数与面积测量的高效化案例

活细胞或活菌的经时变化影响到对培养板内的分析结果与评价，因此重要的是快速获得定量分析结果。
以下图像是对使用BZ-X的图像拼接获得的iPS细胞培养板单孔图像，使用“混合细胞计数”自动实施菌落计数及面积测量的案例。通过大视野观察对培养板整体中菌落的数量及面积的平均、标准偏差、总数值进行定量测量，可快速获得分析结果。由此，得以消除手动计数所需的大量时间与劳力，以及发生人为误差的风险。

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   个数

   251个

   平均面积

   8315 µm²

   面积标准偏差

   12652 µm²

   面积总计

   2086967 µm²

使用物镜：CFI60 CFI Plan Apo λ 10x
图像拼接：7张 × 9张

使用多孔培养板时，通过使用BZ-X的“宏细胞计数”，可以以其中1张图像的分析条件作为模板，在同一条件下批量自动测量其他的多张图像。
采用人工计数对多个孔的菌落进行分析，不仅花费大量的时间与精力，还因不同的测量人员因操作方法不一而发生分析结果及评价上的偏差，BZ-X则可在短时间内轻松实现定量测量与评价。

以同一条件批量测量