用Fucci进行口腔上皮细胞系(Ca 9-22)的细胞周期观察

基于延时拍摄成像的细胞周期观察事例

Fucci(Fluorescent Ubiquitination-based Cell Cycle Indicator)是一种能够对细胞周期进程进行实时有效监控的荧光探针。下列视频就是利用基恩士的All-in-One荧光显微成像系统BZ-X800,对已导入Fucci的口腔上皮细胞系(Ca 9-22)进行拍摄后得到的视频。期间以30分钟为间隔,进行了120次、共计60小时的延时拍摄成像。
利用多点拍摄功能,以30分钟为间隔,对6孔培养板的各培养孔,进行单次3点,共计18点的连续拍摄。

还可局部放大
  1. 还可局部放大

视频来源:
新潟大学医学部
基础医学系 显微解剖学(解剖学第3讲座)
三上刚和 先生

细胞周期观察中的问题点

在用活细胞(Live cell)进行长时间延时拍摄成像的过程中,必须始终维持恒定的温度、CO2浓度和湿度。解决上述问题的简易方法,就是掐准拍摄时机,仅在拍摄时将标本从恒温箱中取出,进行拍摄。但是这种方法又会衍生出“难以再现拍摄位置”、“移动标本会改变其状态,存在污染风险”、“每次拍摄时都要进行人工维护”等诸多问题。

细胞周期观察中的问题点
A
台面式恒温箱
B
温度及CO2控制器

All-in-One荧光显微成像系统BZ-X800采用台面式小型恒温箱,能够在维持标本环境恒定的同时,进行指定次数的自动拍摄。还能借助多点多条件拍摄功能,在改变倍率、滤光片等拍摄条件的同时,进行多点拍摄,只需以简单操作进行延时拍摄成像,就能以超高的效率,加快推动实验进程。

如果引进All-in-One荧光显微成像系统BZ-X800

什么是Fucci?

Fucci技术用发出红色荧光的mKO2(monomeric Kusabira-Orange2)荧光蛋白质,结合G1期(分裂结束后,细胞开始为DNA复制做准备的时期)增长量最大的Cdt1,再用发出绿色荧光的mAG(monomeric Azami-Green1)荧光蛋白质,与Geminin(在从DNA复制到细胞分裂前的S/G2/M期的增长量最大)相结合,就能实现细胞周期进程的可视化,对DNA复制及细胞分裂的情况进行实时观察。
自2008年开发以来,Fucci技术就在不断改良,陆续推出了对细胞核内及细胞整体进行Fucci信号标记的Fucci(N+C);在荧光蛋白质中应用mCherry和mVenus,使G1期和S/G2/M期更易分离的Fucci2;还有追加细胞周期间期(G1、S、G2期)识别能力,借此辨识全部4种细胞周期的Fucci(CA)等等。如今,Fucci技术已经被广泛用于发生学、再生医学、癌肿瘤学等领域,研究与细胞周期息息相关的各类生命现象。